1. 核心功能
核酸特异性染色:
主要结合双链DNA(dsDNA),对双链RNA(dsRNA)有较弱结合,对单链核酸结合力极弱。
细胞活力区分:
活细胞:因细胞膜完整,SYBR 14可渗透进入,将细胞核染成明亮绿色。
死细胞:膜完整性丧失,SYBR 14无法进入,需依赖碘化丙啶(PI)染色(红色荧光)。
2. 作用机制
嵌插结合:通过平面刚性结构嵌入DNA碱基对,结合后分子构象固定,荧光量子产率提升。
双染原理(与PI联用):
活精子:SYBR 14⁺/PI⁻(绿色)。
展开剩余79%死精子:SYBR 14⁻/PI⁺(红色)。
濒死精子:SYBR 14⁺/PI⁺(双染,过渡态)
试剂信息
英文名称:SYBR 14 Nucleic Acid Stain
中文名称:SYBR 14核酸染料
状态:固态
吸收/发射:488nm/518nm
溶解性:易溶于DMSO,需用生理缓冲液稀释至工作浓度
纯度:≥95%
储存条件:-20℃避光干燥
&使用方法1. 试剂准备
储存条件:-20℃避光干燥保存(≥1年稳定)。
工作液配制:
将5 mM原液用生理缓冲液稀释至10–20 μM。
示例:取5 μl SYBR 14(5 mM)加入1 ml稀释样本中。
2. 染色步骤
样本稀释:
用含10% BSA的HEPES缓冲液稀释精液。
染料添加:
加入5 μl SYBR 14工作液(10–20 μM)。
加入5 μl PI溶液(2.4 μM)。
孵育:37℃避光孵育5–10分钟。
检测:
荧光显微镜:FITC滤片观察绿色荧光。
流式细胞仪:488 nm激发,530/30 nm通道检测SYBR 14,>670 nm通道检测PI。
&相关试剂iFluor 405 Phalloidin
Rhod-2TripotassiumSalt
ZnAF-2F,Cell lmpermeant
Cal-630 AM,Cell Permeant
Propidium lodide碘化丙啶(粉末)
SYTOX Green Nucleic Acid Stain
Nuclear Yellow(Hoechst S769121)核黄
SYTO 9 Green Fluorescent Nucleic Acid Stain
SYTOX Orange Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO)
Rhodamine-PNA (Rhodamine labeled Peanut Agglutinin)
西安强化生物科技有限公司xxn对以上内容进行了系统整理!
本试剂用于科研领域,其他用途概不适用!
发布于:陕西省