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科研试剂SYBR 14 Nucleic Acid Stain的使用方法!_荧光_核酸_染色
2025-06-26 14:11    点击次数:193
&功能与作用机制

1. 核心功能

核酸特异性染色:

主要结合双链DNA(dsDNA),对双链RNA(dsRNA)有较弱结合,对单链核酸结合力极弱。

细胞活力区分:

活细胞:因细胞膜完整,SYBR 14可渗透进入,将细胞核染成明亮绿色。

死细胞:膜完整性丧失,SYBR 14无法进入,需依赖碘化丙啶(PI)染色(红色荧光)。

2. 作用机制

嵌插结合:通过平面刚性结构嵌入DNA碱基对,结合后分子构象固定,荧光量子产率提升。

双染原理(与PI联用):

活精子:SYBR 14⁺/PI⁻(绿色)。

展开剩余79%

死精子:SYBR 14⁻/PI⁺(红色)。

濒死精子:SYBR 14⁺/PI⁺(双染,过渡态)

试剂信息

英文名称:SYBR 14 Nucleic Acid Stain

中文名称:SYBR 14核酸染料

状态:固态

吸收/发射:488nm/518nm

溶解性:易溶于DMSO,需用生理缓冲液稀释至工作浓度

纯度:≥95%

储存条件:-20℃避光干燥

&使用方法

1. 试剂准备

储存条件:-20℃避光干燥保存(≥1年稳定)。

工作液配制:

将5 mM原液用生理缓冲液稀释至10–20 μM。

示例:取5 μl SYBR 14(5 mM)加入1 ml稀释样本中。

2. 染色步骤

样本稀释:

用含10% BSA的HEPES缓冲液稀释精液。

染料添加:

加入5 μl SYBR 14工作液(10–20 μM)。

加入5 μl PI溶液(2.4 μM)。

孵育:37℃避光孵育5–10分钟。

检测:

荧光显微镜:FITC滤片观察绿色荧光。

流式细胞仪:488 nm激发,530/30 nm通道检测SYBR 14,>670 nm通道检测PI。

&相关试剂

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Rhod-2TripotassiumSalt

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西安强化生物科技有限公司xxn对以上内容进行了系统整理!

本试剂用于科研领域,其他用途概不适用!

发布于:陕西省